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qPCR、ELISA

ELISA检测

 

ELISA(酶联免疫吸附)检测是指将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。

一、实验原理

结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上 。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。

二、实验流程

三、样本制备

1. 检测的样本为细胞培养上清、细胞粗提液、人和动物的血清、血浆等。

(1)血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(200-3000转/分),收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

(2)血浆:应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

(3)组织标本:切割标本后,称取一定量组织,加入PBS,用手工或勺浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,可以在液氮中充分研磨匀浆。

(4)动物细胞:用PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。超声波破碎细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

2. 样本收集后应立即保存于-20度条件下,若长期保存应保存于-70度条件下。

四、结果交付

实验报告及原始数据

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