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科研动态

水果有机酸的测定

有机酸测定选多米诺生物

有机酸是指广泛存在于生物中的一种含有羧基的酸性有机化合物(不包括氨基酸)。最常见的有机酸是羧酸,其酸性源于羧基(-COOH);磺酸(R-SO3H)、亚磺酸(RSOOH)、硫羧酸(RCOSH)等也属于有机酸。水果中苹果酸、柠檬酸、酒石酸等含量较高,此外还有乳酸、琥珀酸等,有机酸因水果种类、品种和成熟度不同而异。有机酸促进食欲,有利于食物的消化。同时有机酸可使食物保持一定酸度,对维生素C的稳定性具有保护作用。

1、测定原理

试样用0.2%盐酸溶液提取后,采取高效液相色谱法检测,经反相色谱柱分离,以保留时间定性,外标法定量。

2、样品溶液制备

称取5.0 g样品,切碎,以1∶10料液比加入含0.2%盐酸的蒸馏水,超声提取30 min,过滤,滤渣以上述方法再提取一次,合并滤液,浓缩,定容,待HPLC定量分析。

3、标准溶液的制备

分别精密称取草酸、酒石酸、奎宁酸、甲酸、苹果酸、莽草酸、乳酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸对照品,用蒸馏水根据标准品在H P L C 中的响应值大小配制成8~20 mg/mL不同质量浓度的标准品储备液,再稀释制备成不同质量浓度的对照品溶液。

4、色谱条件

色谱柱:Xtimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH 2.5);检测波长:210 nm;柱温:40 °C;进样量:10 μL;流速:0.8 mL/min。

5、有机酸标准曲线的建立

将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰高或峰面积。以标准工作液的浓度为横坐标,以色谱峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。有机酸的标品谱图如下:

有机酸标准对照品HPLC图

1.草酸、2.酒石酸、3.奎宁酸、4.甲酸、5.苹果酸、 6.莽草酸 、 7.乳 酸、 8.乙酸 、 9.柠檬酸 、10. 琥珀酸。

6、试样溶液的测定

将待测液注入高效液相色谱仪中,得到峰高或峰面积,根据标准曲线得到待测液中有机酸的浓度。

7、结果计算

试样中的有机酸含量按下式计算:

X=c*V*1000/m/1000

式中:X——试样中有机酸的含量,单位为克每千克(g/kg);C——由标准曲线求得试样溶液中某有机酸的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);V——样品溶液定容体积,单位为毫升(mL);m——试样质量,单位为克(g);1000——换算系数。

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